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第15章 内科疾病用药(15)

临床应用:临床常用本药清热解毒、利尿通淋。用于下焦湿热证,表现为尿频、尿急、尿道灼热、涩痛、尿液黄赤或腰痛,少腹疼痛。

发热、舌苔黄腻、脉弦数及急慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎、尿路结石、前列腺炎、阴道炎、盆腔炎、宫颈炎、淋病及性病后遗症等见上述证候者的治疗,疗效确切。

三金片

主要成分:金樱根、菝葜、羊开口、海金沙、积雪草。

功能主治:清热,解毒,利湿通淋,益肾。用于下焦湿热、热淋、小便短赤、淋沥涩痛;急、慢性肾盂肾炎,膀胱炎、尿路感染属肾虚湿热下注证者。

用法用量:口服,每次3片,3~4/d。

药理作用:抑菌,抗感染,消肿,清热,利尿,镇痛,抗氧自由基,提高机体免疫力等。

1.利尿作用SD系成年、健康、普通级大鼠,雌雄兼用,实验前2d,每日于10时及16时分别给大鼠灌胃给水2.5ml/100g体重各1次。

末次灌水后1h,即17时撤去饲料和水。第2天8时实验时各鼠按2.5ml/100g体重经灌胃给5%葡萄糖生理盐水作为水负荷,并将动物随机分为5组,即生理盐水对照组、三金胶囊24g/kg、12g/kg、4g/kg各1组及氢氯噻嗪(25mg/kg)组,每组12只动物。各组动物均单个置于代谢笼内,代谢笼参照文献制备。于给水负荷后40min,开始灌胃给药,容量均为100g体重2.5ml。给药后即开始收集各鼠尿液。从给药后(0时间)开始到120min测量并记录各鼠尿量1次,之后每1h测量记录1次,直至给药后7h。将各鼠各次尿液合并混匀后取样用生化自动分析仪测定尿K+、Na+、Cl-含量。结果从各组每鼠平均总尿量及尿量平均增加百分比可以看出,三金胶囊3个剂量组给药后7h内的总尿量均大于生理盐水组,其中以12g/kg组比生理盐水组显著增加,分别为(3.99±1.63)ml和(2.65±1.32)ml。三金胶囊大、中、小剂量及氢氯噻嗪25mg/kg组给药后7h总尿量增加百分比分别为3.3%,50.2%,20.2%和197.3%。说明三金胶囊的利尿作用确切、温和。各组给药后7h内平均每100g体重总尿量及每100g体重总尿量增加%(以生理盐水组为100%)。三金胶囊具有明显利尿作用,仍以中剂量(12g/kg)的作用显著。给药后不同时间内各组每只动物的平均排尿量。数据的统计学分析显示,三金胶囊中剂量(12g/kg)和低剂量(4g/kg)组给药后头2h内每只动物平均总尿量与生理盐水组比较,增加明显,而大剂量三金胶囊组头2h平均每只动物总尿量(1.06±0.73)ml不及生理盐水组(1.22±0.90)ml但无显著差异。其余各时间点各组每只动物平均尿量与生理盐水组无显著差异。三金胶囊给药后7h内混合尿液中K+、Na+、Cl含量改变。三金胶囊能明显减少尿Na+、Cl的含量。仅大剂量时可明显增加尿K+含量,中、小剂量则对尿K+含量无明显影响。

2.治疗泌尿系感染的机制研究细菌悬液尿道致病性大肠杆菌(UEC),自一女性肾盂肾炎患者尿中分离出,具有P菌毛;普通大肠埃希菌(由广东省防疫中心提供),具有Ⅰ菌毛。供试菌在使用前经培养用生理盐水配制成109个/ml的细菌悬液。尿道上皮细胞悬液取健康女性晨尿,离心,取沉淀,用生理盐水洗2遍,配制成105个/ml的细胞悬液。NIH系小鼠。方法:抗UEC黏附作用:体外抗UEC黏附作用:先将三金片剥去糖衣,研碎,用蒸馏水溶解并配成0.50%(g/ml)的浓度。过滤后,低速离心,取上清液,高压灭菌。另将上述0.50%的三金片溶液用营养肉汤配制成0.25%,0.175%的稀释液备用。取上述3种浓度的三金片溶液各3m1,另取3m1营养肉汤作对照,分别接种0.1ml的UEC,与普通大肠埃希菌悬液,37℃静止培养18h,低速离心,取沉淀,生理盐水冲洗2遍,再配制成109个/ml的细菌悬液,作为经中药处理过的细菌悬液。分别取上述药中经处理过和未经中药处理过的细菌悬液各0.2ml,分别加入0.2ml尿道上皮细胞悬液混合,加生理盐水至1ml,将上述混合液置37℃振荡孵育30min后,反复洗涤离心,除去未黏附的细菌,取沉淀,适当稀释,涂片、干燥、热固定,复红染色,计数20个上皮细胞所黏附的UEC数,计算平均值并作数理学统计。体内抗UEC黏附作用以健康女性为受试者,近期未服任何药物。晚睡前,排尿后(留取尿液20ml),口服100mg三金片,收集药后4h尿及次日晨尿各20ml;分别将药前尿、药后4h尿及次日晨尿离心,取上清液3m1,接种0.1ml的细菌悬液,37℃静止培养18h,离心后,取沉淀,生理盐水冲洗2遍,再配成109个/m1的细菌悬液,然后同体外抗黏附试验操作,并计算。结果,体外抗UEC黏附作用的结果显示,未经三金片处理的LIEC,可大量黏附在尿道上皮细胞上,而经3种不同浓度三金药液处理后的UEC则其黏附于尿道上皮细胞上的细菌数与对照组均有明显减少。说明其有良好的体外抗UEC黏附作用。体内抗UEC黏附作用结果表明,经服三金片后4h及次日晨尿液处理过的UEC黏附于尿道上皮细胞上的数量与营养液培养的经药前尿液处理的UEC黏附数量比较,有明显减少,而普通大肠埃希菌,无论经药前尿、药后尿或未经任何处理,其黏附于尿道上皮细胞上的数量均很少,无明显差异。

3.对免疫低下小鼠免疫功能的影响

(1)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响:选用18~22g体重的NIH小鼠,随机均分为5组,即三金浸膏大、中、小3个剂量组(生药24g、12g、4g/kg,下同);氢化可的松组(50mg/kg);空白对照组。均灌胃给药,空白对照组及氢化可的松组灌胃给水,1/d,连续10d。除空白对照组外,其余各组于第1、第6天给药的同时皮下注射氢化可的松。

末次给药当晚腹腔注射5%鸡红细胞0.4ml鼠,10h后取腹腔液涂片(1)。

将涂片置37℃孵育30min,取出后用生理盐水冲洗晾干,姬姆萨-瑞氏染色,油镜下计数100个巨噬细胞,计算吞噬率及吞噬指数。结果:三金浸膏中、小剂量组的腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数明显高于氢化可的松组;而氢化可的松组的吞噬百分率及吞噬指数均明显低于空白对照组。

(2)对小鼠体内溶血素形成的影响:选用18~22g体重的NIh小鼠。设三金浸膏大、中、小3个剂量组,均灌胃给药,并设环磷酰胺组及空白对照组,均灌胃给水,每天1次,连续10d。除空白对照组外,其余各组于第1、4、8天给药的同时皮下注射环磷酰胺20mg/kg,于第4天给药的同时腹腔注射SRBC(2×10ml)0.2ml只鼠免疫。免疫后第6天小鼠断头取血,按文献方法进行溶血素测定。结果:三金浸膏3个剂量组的半数溶血值均明显高于环磷酰胺组。环磷酰胺组与空白对照组比则明显降低。

(3)对小鼠周围血T淋巴细胞百分率的影响:采用酸性A-醋酸萘酯酶(ANAE)测定法(3),选用NIh小鼠45只,随机分为5组,每组10只,三金浸膏设3个剂量组,均灌胃给药,并设氢化可的松组及空白对照组,均灌胃给水,每天1次,连续10d。除对照组外,其余各组于第1天、第6天给药的同时皮下注射氢化可的松(50mg/kg),末次给药后1h鼠尾取血涂片,按文献方法进行ANAE测定,镜检100个淋巴细胞,求ANAE阳性百分率(T淋巴细胞百分率)。结果:三金浸膏中、小剂量组的ANAE阳性百分率明显高于氢化可的松组。

(4)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响:选用18~22g体重的NIH小鼠,随机分为6组。各组均灌服给药,空白对照组及氢化可的松组灌服水,1/d,连续10d。除空白对照组外,其余各组于第1、6天给药的同时皮下注射氢化可的松。末次给药当晚腹腔注射5%鸡红细胞,0.4ml/只,10h后取腹腔液涂片。将涂片置37℃孵育30min,取出后用生理盐水冲洗晾干。姬姆萨–瑞氏染色,油镜下计数100个巨噬细胞的吞噬百分率。

(5)对小鼠溶血素形成的影响:结果三金浸膏3个剂量组及左旋咪唑组的半数溶血值均明显高于环磷酰胺组,环磷酰胺组与空白对照组比较明显降低。

(6)对泼尼松所致免疫低下小鼠非特异性免疫功能的影响:选取10~12g健康NIH系小鼠50只,雌、雄各半,随机分为5组,正常组、模型组给蒸馏水20ml/kg,三金片3个剂量组胃内给药,1/d,连续7d。

于给药的第3天起,除正常组外其余各组均同时每天胃内给泼尼松0.05g/kg。连续5D造模,末次药后12h,按小鼠碳粒廓清法测定各鼠的吞噬指数并按免疫器官重量法测定各鼠免疫器官重量。结果三金片3个剂量组均可显著增加泼尼松所致免疫低下小鼠单核吞噬细胞的吞噬功能;低、中、高3剂量组均可显著增加小鼠免疫器官胸腺、脾的重量,说明三金片可提高小鼠的非特异性免疫功能,有对抗免疫低下的作用。

(7)对泼尼松所致免疫低下小鼠体液免疫功能的影响选取18~22gNIh系小鼠60只,雌、雄各半,随机分为5组,正常组、模型组给蒸馏水20mg/kg,三金片3个剂量组胃内给药,1/d,连续7d,于给药的第3天起,所有动物均腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.2ml进行免疫,同时,除正常组外,各组于给药的第3天起胃内泼尼松0.05g/kg,连续5D造模。末次药后12h按鸡红细胞做免疫原的溶血素测定。免疫试验:对泼尼松所致免疫低下小鼠非特异性免疫的影响结果表明,对泼尼松所致免疫低下小鼠体液免疫功能的影响:结果表明,三金片2个剂量组均可显著增加泼尼松所致免疫低下时鸡红细胞做免疫原的小鼠溶血素含量,说明三金片具有提高体液免疫功能的作用。

4.抗感染消肿作用三金浸膏大、中、小剂量和阿司匹林均能明显减轻二甲苯所致的小鼠耳肿,与对照组比较均有显著差异。

三金浸膏大剂量和阿司匹林均能明显降低大鼠足环的角叉菜胶性炎症肿胀率,其作用可持续4h以上:中剂量在给药后1h和4h的肿胀明显低于对照组:小剂量的肿胀率亦低于对照组,但差异无显著性意义。

三金浸膏大剂量和阿司匹林均能明显减轻大鼠肉芽肿的重量,可见三金浸膏具有显著抑制肉芽肿形成的作用。

5.镇痛作用热板法结果表明,三金浸膏大、中、小剂量给药后30min及大、中剂量给药后60min能明显提高动物的痛阈。阿司匹林亦能明显提高动物的痛阈,持续时间达60min以上。提示三金浸膏具有显著的镇痛作用。

扭体法结果表明,三金浸膏中、小剂量和阿司匹林可明显减少小鼠腹腔注射醋酸引起的疼痛反应(扭体)次数,提示三金浸膏具有显著的镇痛作用。

6.抑菌试验体内抑菌试验选取健康NIh小鼠500只,雌雄各半,均匀分为20只。分别给予参试药物,1/d,连续灌服7d。于第3次给药后60min,各组小鼠分别腹腔注射经培养基稀释的细菌悬液,金黄色葡萄球菌(10-3)、铜绿假单胞菌(10-3)、大肠埃希菌(10-4)、甲型链球菌(10-2),染菌后继续给药,停药后观察1周,记录小鼠存活数。

大剂量组对感染金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、甲型链球菌的小鼠有明显保护作用,但对大肠埃希菌作用不明显:中剂量组对感染金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的小鼠亦有保护作用,但对大肠埃希菌、甲型链球菌作用不明显:小剂量组对4种实验菌作用均不明显。头孢氨苄对以上4个实验菌有非常明显的体内抑菌作用。

尿液抑菌浓度:测定选取健康SD大鼠30只,雌、雄各半,均匀分为3组。分别灌服三金浸膏18g/kg,头孢氨苄0.5g/kg及生理盐水,每隔3h给药1次,共给药4次。第1次给药后分别将大鼠放入代谢笼,收集24h尿液,测定每鼠尿量,将同组尿液合并,混匀,滤纸过滤,115℃高压灭菌15min,凉后,测定尿液的抑菌浓度。浸膏组动物尿液稀释度在1∶2~1∶32对伤寒杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、甲型链球菌、乙型A族链球菌、肺炎链球菌有抑菌作用,对铜绿假单胞菌和大肠埃希菌无效。生理盐水对照组的尿液无抑菌作用。

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